रसायन विज्ञान

व्यवहार में पीसीआर

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में पीसीआर उत्पादों का पता लगाना रियल टाइम-पीसीआर

NS रियल टाइम-पीसीआर, संक्षिप्त आरटी-पीसीआर या क्यूआरटी-पीसीआर (मात्रात्मक) रियल टाइम-पीसीआर) - (मात्रात्मक) रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस पीसीआर के साथ भ्रमित नहीं होना चाहिए, जिसे इस रूप में भी संक्षिप्त किया गया है - एक पीसीआर विधि है जिसमें प्रतिक्रिया के घातीय चरण के दौरान फ्लोरोसेंस के माध्यम से वास्तविक समय में उत्पादों की मात्रा निर्धारित की जा सकती है। फ्लोरोसेंट रंगों के बिना पीसीआर के मामले में, उत्पाद की मात्रा केवल प्रतिक्रिया के अंत में निर्धारित की जा सकती है - यानी केवल एक अंतिम बिंदु निर्धारण।

के लिए उपकरण रियल टाइम-पीसीआर और पता लगाने का सिद्धांत

पीसीआर डिवाइस मूल रूप से सभी थर्मल साइक्लर होते हैं, जिसमें एक निश्चित तापमान प्रोफ़ाइल को प्रोग्राम किया जा सकता है, और लगभग सभी आधुनिक उपकरण तथाकथित लाइट साइक्लर होते हैं। ये लाइट साइकिलर्स रीयल-टाइम या . की अनुमति देते हैं रियल टाइम-पीसीआर जिसमें फ्लोरोसेंट जांच से प्रकाश उत्सर्जन के बाद प्रतिक्रिया के पाठ्यक्रम का पालन किया जा सकता है।

दो सामान्य पीसीआर प्राइमरों के अलावा, इस तकनीक के लिए एक या दो अतिरिक्त संकरण जांच की आवश्यकता होती है जो अनुक्रम को विशेष रूप से पीसीआर उत्पादों से बांधती है और दो या (मल्टीप्लेक्स पीसीआर के मामले में) कई अलग-अलग फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल की जाती है। यदि ये फ्लोरोक्रोम एक दूसरे के निकट हैं, जैसे पीसीआर की शुरुआत में, कोई फ्लोरेसेंस संकेत नहीं है।

हालांकि, अगर इन दो फ्लोरोक्रोम को पीसीआर प्रवर्धन के दौरान अलग किया जाता है, तो एक निश्चित तरंग दैर्ध्य का प्रकाश उत्सर्जित होता है। प्रयोग के दौरान इस प्रकाश उत्सर्जन का पालन किया जा सकता है और एक मानक की तुलना में पीसीआर दृष्टिकोण में शुरुआती उत्पाद की एकाग्रता के बारे में निष्कर्ष निकालने में सक्षम बनाता है।


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